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細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的檢測(cè)方法和防治措施

更新時(shí)間:2025-03-11  |  點(diǎn)擊率:218
  支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的影響是多方面的。首先,支原體能夠通過(guò)與細(xì)胞的相互作用,改變細(xì)胞的代謝和增殖模式,影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。支原體的代謝產(chǎn)物,如某些酶和毒素,可能直接破壞細(xì)胞膜,導(dǎo)致細(xì)胞死亡或功能喪失。其次,支原體的存在可能引發(fā)細(xì)胞基因組的改變,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的失真和誤導(dǎo)。
  在一些生物制藥領(lǐng)域,支原體污染不僅影響細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性,還可能影響藥物的質(zhì)量控制。例如,在單克隆抗體生產(chǎn)過(guò)程中,支原體的存在可能對(duì)抗體的產(chǎn)量、純度以及活性產(chǎn)生顯著影響,從而影響產(chǎn)品的療效。某些支原體菌株還可能通過(guò)生產(chǎn)某些毒素影響人體健康,因此,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染問(wèn)題,不容忽視。
 

 

  細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的檢測(cè)方法:
  1.顯微鏡觀(guān)察法
  盡管支原體體積較小,但可以通過(guò)顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)液中的微小顆粒,并進(jìn)行初步判斷。然而,由于支原體的形態(tài)多樣且無(wú)法通過(guò)常規(guī)顯微鏡清晰分辨,因此僅憑此方法并不能準(zhǔn)確識(shí)別支原體污染。
  2.染色法
  使用特定的染色劑(如吉姆薩染色)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,有助于在顯微鏡下觀(guān)察到支原體的存在。這種方法相對(duì)簡(jiǎn)單,但也存在一定的局限性,尤其是在低濃度污染的情況下,檢測(cè)的靈敏度較差。
  3.培養(yǎng)法
  支原體可以在特定的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)并觀(guān)察是否有細(xì)菌生長(zhǎng),能夠檢測(cè)到支原體的存在。這種方法需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間,且需要較高的技術(shù)要求,因此在日常實(shí)驗(yàn)中使用較少。
  4.分子生物學(xué)檢測(cè)法
  PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是目前常用的支原體檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)樣本中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增,能夠高效、準(zhǔn)確地檢測(cè)出支原體的特定基因序列。這種方法靈敏度高,檢測(cè)速度快,已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中常用的支原體檢測(cè)手段。
  5.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
  通過(guò)檢測(cè)支原體相關(guān)的抗原或抗體,ELISA法可以快速識(shí)別支原體污染的跡象。該方法適用于高通量篩查,但其準(zhǔn)確性和靈敏度較PCR方法稍遜。
  細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的防控措施:
  1.良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范
  實(shí)驗(yàn)室操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,定期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室清潔消毒,確保培養(yǎng)基、培養(yǎng)瓶、移液槍等工具的無(wú)菌性。操作人員在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行手部清潔和消毒,避免支原體通過(guò)空氣或接觸傳播到培養(yǎng)物中。
  2.采購(gòu)無(wú)支原體污染的細(xì)胞株和培養(yǎng)基
  選擇信譽(yù)良好的供應(yīng)商購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株和培養(yǎng)基,確保其未受到支原體污染。同時(shí),可以要求供應(yīng)商提供支原體檢測(cè)報(bào)告,以確保所購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞株和培養(yǎng)基安全無(wú)菌。
  3.使用抗生素控制污染
  在細(xì)胞培養(yǎng)的初期,可以適當(dāng)加入抗生素,如青霉素、鏈霉素等,以減少細(xì)菌污染的可能性。然而,需要注意的是,抗生素并不能全防止支原體污染,且長(zhǎng)期使用抗生素可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的抗藥性,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,抗生素的使用應(yīng)適度。
  4.定期檢測(cè)和監(jiān)控
  定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)是防止污染擴(kuò)散的關(guān)鍵措施。除了常規(guī)的支原體檢測(cè),建議實(shí)驗(yàn)人員在每個(gè)實(shí)驗(yàn)周期開(kāi)始前對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行支原體檢查,一旦發(fā)現(xiàn)污染,及時(shí)采取措施進(jìn)行處理。
  5.對(duì)污染細(xì)胞系的處理
  一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系受到支原體污染,應(yīng)立即停止使用被污染的細(xì)胞株,并對(duì)污染源進(jìn)行清理。如果污染較為嚴(yán)重,可能需要廢棄整批細(xì)胞株,并重新購(gòu)買(mǎi)或復(fù)蘇干凈的細(xì)胞株。
  6.培養(yǎng)環(huán)境的控制
  溫度、濕度和氣體成分的控制對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持恒定的環(huán)境條件,避免因環(huán)境因素對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生負(fù)面影響,從而提高細(xì)胞的抗污染能力。
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