肌苷誘導(dǎo)CAR-T細(xì)胞的干性特征并增強(qiáng)效力，德國MB助力科研

細(xì)胞治療項目需要進(jìn)行支原體檢測，并且根據(jù)藥典要求，通過方法學(xué)驗證，德國MB支原體qPCR檢測試劑盒，通過歐洲藥典和日本藥典的方法學(xué)驗證

腺苷(Ado)是一種免疫抑制核苷，有助于腫瘤微環(huán)境(TME)的免疫逃避。CD39(外ATP二磷酸水解酶-1,ENTPD-1)和CD73(5′-外核苷酸酶，NT5E)將ATP代謝為Ado, Ado主要通過A2aR信號介導(dǎo)免疫抑制小鼠CD4+ treg共表達(dá)CD39和CD73，部分通過產(chǎn)生ado介導(dǎo)免疫抑制。在人類中，大多數(shù)treg表達(dá)CD39，而CD73的表達(dá)可由缺氧誘導(dǎo)因子1- α (HIF1a)誘導(dǎo)。在TME中，腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞富集于CD39+亞群。盡管一些研究將改善預(yù)后與更高數(shù)量的CD39+腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞相關(guān)聯(lián)，但功能研究表明，CD39標(biāo)志著功能失調(diào)、耗竭的T細(xì)胞。

嵌合抗原受體(CARs)將細(xì)胞外抗原結(jié)合域連接到細(xì)胞內(nèi)信號域，從而實現(xiàn)mhc不依賴的抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)CAR-T細(xì)胞對難治性B細(xì)胞惡性腫瘤非常有效，但對實體瘤的作用較弱，耗盡是限制CAR-T細(xì)胞效力的主要因素。

在這里，探討了CD39的生物學(xué)特性和Ado在耗盡的人類T細(xì)胞功能障礙中的作用，并試圖通過工程腺苷抵抗來增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的效力。通過體外人類CAR-T細(xì)胞衰竭模型，我們觀察到耗盡的CD8+CD39+ T細(xì)胞共表達(dá)CD73，產(chǎn)生Ado，并通過A2aR介導(dǎo)Ado相關(guān)的抑制。為了誘導(dǎo)Ado抗性，科研人員敲除了CD39、CD73或A2aR，但只觀察到適度的表型和轉(zhuǎn)錄變化。相反，將Ado代謝為肌苷(INO)的膜系鏈腺苷脫氨酶(ADA)的過表達(dá)顯著改變了CAR-T細(xì)胞的干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組，增強(qiáng)了CAR-T細(xì)胞的適應(yīng)性。同樣，CAR-T細(xì)胞暴露于INO誘導(dǎo)了干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)程序并增強(qiáng)了CAR-T細(xì)胞的功能。

單細(xì)胞分析顯示，INO重編程代謝組，減少糖酵解，但增加谷氨酰胺解，多胺合成和氧化磷酸化。這些影響與向莖稈方向的表觀遺傳重編程有關(guān)。臨床規(guī)模生產(chǎn)使用ino補(bǔ)充培養(yǎng)基產(chǎn)生的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品符合臨床劑量標(biāo)準(zhǔn)，在動物模型中顯示出增強(qiáng)的效力。這些數(shù)據(jù)確定了INO是CAR-T細(xì)胞干細(xì)胞的誘導(dǎo)劑，并提供了營養(yǎng)調(diào)節(jié)可以驅(qū)動調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化和增強(qiáng)T細(xì)胞適應(yīng)性的表觀遺傳變化的證據(jù)。