葉酸測(cè)定培養(yǎng)基菌株活化及菌懸液制備方法及注意事項(xiàng)

　　葉酸測(cè)定培養(yǎng)基葉酸是鼠李糖乳桿菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)素，在一定控制條件下，將鼠李糖乳桿菌液接種至含有式樣液的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時(shí)間后測(cè)定透光率（或吸光度值），根據(jù)葉酸含量與透光率（或吸光度值）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出試樣中葉酸的含量。

　　葉酸測(cè)定培養(yǎng)基的菌株活化及菌懸液制備

　　1.將鼠李糖乳桿菌轉(zhuǎn)接至瓊脂培養(yǎng)基中，在37℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h-24h，連續(xù)傳中2代-3代。

　　2.實(shí)驗(yàn)前一天，取2mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液與4mL葉酸測(cè)定用培養(yǎng)液混勻，分裝至2支5mL離心管中，于121℃高壓滅菌15min即為種子培養(yǎng)液。待冷卻后用接種環(huán)將活化的菌株轉(zhuǎn)種至2支種子培養(yǎng)液中，于37℃±1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h-24h。將種子培養(yǎng)液混勻，無(wú)菌操作下吸取0.5mL轉(zhuǎn)種至另2支已消毒但不含葉酸的培養(yǎng)液中，37℃±1℃培養(yǎng)6h，振蕩混勻，制成接種液，立即使用。

　　注意事項(xiàng)：制備菌株過(guò)程需注意嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，防止污染雜菌。

　　葉酸測(cè)定培養(yǎng)基的樣品處理

　　1.直接提取法：稱(chēng)取固體試樣或液體試樣0.5g-2g（精確到0.001g），轉(zhuǎn)入100mL錐形瓶中，加入80mL氫氧化鈉乙醇溶液，超聲振蕩2h-4h至試樣*溶解或分散，用水定容至刻度。

　　2.酶解提取法：稱(chēng)取適量試樣（精確到0.001g），轉(zhuǎn)至100mL錐形瓶中，加入30mL磷酸緩沖液，振搖5min后，于121℃高壓水解15min；待試樣冷卻至室溫，加入1mL雞胰腺溶液（含有蛋白質(zhì)、淀粉的試樣需另加入1mL蛋白酶-淀粉酶液）混合，加入3滴-5滴甲苯后，置于37℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)酶解16h-20h，取出轉(zhuǎn)入100mL容量瓶，加水定容至刻度，過(guò)濾。