細胞培養(yǎng)之支原體檢測方法~支原體常規(guī)PCR法

細胞培養(yǎng)過程中，由于實驗環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。

同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發(fā)覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續(xù)受到影響，導致實驗數(shù)據(jù)不準確。

支原體污染不僅是細胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象，而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么？

支原體常規(guī)PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的，根據(jù)支原體核糖體的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出判斷。

它的優(yōu)點是準確度很高，特別是德國MB的試劑盒，不僅qPCR的靈敏度可以達到10CFU/ml以上，普通PCR的靈敏度也可以達到各國藥典的這個要求。

特異性強，*涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。與細菌和真核DNA無交叉反應。

操作比qPCR多了個跑電泳的步驟。

時間短，2-3小時可以出結(jié)果。

唯yi的限制，因為檢測的是支原體的DNA，所以無法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過程中，本身不應該產(chǎn)生支原體污染，污染過也不行，所以這個限制反而變成了優(yōu)點。