大腸埃希菌O157的ISO方法解讀

大腸埃希菌O157作為食品致病菌，早就引起人類的注意。2001年，ISO發(fā)布了ISO 16654:2001食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—大腸埃希菌O157檢測(cè)的水平方法，對(duì)食品和飼料中的E.coli O157檢測(cè)，給出了標(biāo)準(zhǔn)方法。

O157是E.coli的血清型。我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)要求在牛肉制品和生食果蔬制品中不得檢出。在ISO 16654:2001中，E.coli O157的檢測(cè)分為四步：

1）增菌。采用含新生霉素的改良型TSB肉湯，41.5℃孵育6h，再緊接著孵育12-18h；

2）分離和富集。需要采用針對(duì)O157的抗體包被的免疫磁珠；

3）檢出：采用CT-SMAC平板和另一款原理不同的選擇性分離瓊脂

4）驗(yàn)證：對(duì)CT-SMAC平板上的山梨醇陰性菌落和第二款選擇性分離瓊脂上的E.coli O157典型菌落，通過吲哚試驗(yàn)和E.coli O157抗血清的凝集試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

增菌階段，ISO推薦用Modified tryptone soya broth，即改良型TSB肉湯，對(duì)此，HIMEDIA生產(chǎn)有Soyabean Bile Broth Base（貨號(hào)M1286）和新生霉素添加劑（貨號(hào)FD290），配方和ISO推薦的改良型TSB肉湯*一致，可以采用。

對(duì)于CT-SMAC瓊脂，HIMEDIA也生產(chǎn)有相應(yīng)培養(yǎng)基（貨號(hào)M1340，加添加劑，貨號(hào)為FD147），培養(yǎng)結(jié)果見下圖。O157為無色菌落。但不排除假陽(yáng)性，如假單胞菌在此培養(yǎng)基中也可產(chǎn)生無色菌落。此時(shí)可進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，在5-10秒內(nèi)觀察結(jié)果。假單胞菌為陽(yáng)性，而O157為陰性。

同時(shí)，ISO 16654:2001也指出，存在山梨醇陽(yáng)性的E.coli O157不會(huì)被CT-SMAC平板檢測(cè)到。因此推薦同時(shí)使用另外一款選擇分離培養(yǎng)基。此時(shí)可考慮HIMEDIA的另外一款O157選擇性瓊脂（顯色培養(yǎng)基），貨號(hào)為MV157，品名為HiCrome™ EC O157:H7 Selective Agar Base,Modified，配合添加劑（貨號(hào)FD187）一起使用。其檢測(cè)效果見下圖。E.coli O157:H7能旺盛生長(zhǎng)，菌落呈深紫色，而普通E.coli呈藍(lán)綠色。

培養(yǎng)基添加劑中的亞碲酸鉀能抑制氣單胞菌和普羅威登菌生長(zhǎng)，新生霉素抑制革蘭陽(yáng)性菌，月桂基硫酸鈉抑制伴隨的革蘭陽(yáng)性菌群。

在驗(yàn)證階段，ISO也提示，發(fā)現(xiàn)存在吲哚陰性的突變菌。因此，也可以考慮用qPCR或多種生化鑒定的方式進(jìn)行驗(yàn)證。