一種耐熱大腸菌群分離方法

大腸菌群是指在37℃條件下24h內能夠發(fā)酵乳糖產酸產氣的無芽孢革蘭陰性桿菌，主要包括腸桿菌科的4個屬即埃希氏菌屬 (Escherichia)、枸櫞酸桿菌屬(Citrobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)和腸桿菌屬(Enterobacter)的細菌。該類細菌主要來源于人和溫血動物的糞便，故將大腸菌群作為食品被人和溫血動物糞便污染的指示菌來評價食品的衛(wèi)生質量。

耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform bacteria）是總大腸菌群的一部分，將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群（或糞大腸菌）。北美國家一般使用“糞大腸菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“糞大腸菌群”概念為等同采用AOAC方法，故而使用糞大腸菌群概念；而歐洲使用“耐熱大腸菌群”概念，較少使用“糞大腸菌群”。一般歐洲學者認為，“糞大腸菌群”的提法不太科學，耐熱大腸菌群的范圍比糞大腸菌群范圍大。

我國生活飲用水衛(wèi)生標準規(guī)定每100 mL 水樣中不得檢出耐熱大腸菌群。用該菌的檢出情況來判斷水中是否受到人畜糞便的污染。耐熱大腸菌群數的高低，表明了糞便污染的程度，也反應了對人體健康危害程度的大小。糞便是人畜腸道排泄物，其中有健康的，也有腸道帶菌的，糞便內除一般正常外，同時也會有一些腸道致病菌存在，所以水中有糞便污染，則可能推測水中著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著與水有關的傳染病，對人體健康具有潛在的危險性。目前檢測耐熱大腸菌群的方法有酶底物法、多孔微板法、紙片法、熒光原位雜交法、PCR法等。但多存在技術不完整，檢測成本高，操作繁瑣等缺點，目前，國標GB/T5750-2006《生活飲用水標準檢測方法》中耐熱大腸菌群的方法有多管發(fā)酵法和膜過濾法。

HiMedia公司（微生物培養(yǎng)基生產商）生產的貨號：M1571是一種用于檢測和計數水中耐高溫大腸菌群膜過濾法。經過改良的培養(yǎng)基中含有顯色原、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸，被大腸菌群由酶-葡糖醛酸酶裂解生成葡萄糖醛酸，只對大腸桿菌的菌落顯色形成紫色菌落。培養(yǎng)基中的蛋白棟和酵母提取物為菌種提供了必需的營養(yǎng)素，乳糖是可發(fā)酵的碳水化合物，氯化鈉保持滲透平衡，磷酸二氫鉀和磷酸二鉀提供強有力的緩沖，在發(fā)酵作用下控制pH值，十二烷基硫酸鈉和脫氧膽酸鈉通過抑制革蘭陽性細菌使培養(yǎng)基更有選擇性。通過膜過濾器，通過水樣本被涂到培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基在44.5±0.2 ℃，培養(yǎng)22-24h。大腸桿菌將在膜過濾培養(yǎng)基上形成紫色到洋紅色的菌落。

HiMedia公司的耐熱大腸菌群顯色培養(yǎng)基在上被廣泛應用，如HeyangYuan等人研究電子受體對厭氧條件下抗生素抗性大腸桿菌、抗性基因和1類整合子基因敲除的影響文章中就有應用（HeyangYuan, Jennifer H.Miller, Ibrahim M.Effects of electron acceptors on removal of antibiotic resistant Escherichia coli, resistance genes and class 1 integrons under anaerobic conditions.Science of The Total Environment[J], 2016(11)1 : 1587-1594.）；Jvo Siegrist也用它鑒別和檢測大腸桿菌和其他大腸菌群中也有應用（Jvo Siegrist.Selective Growth Media for Differentiation and Detection of Escherichia Coli and Other Coliforms. Product Manager Microbiology[J]. 2011,11(8):1-5.）